CDNA文库

CDNA 文库是插入宿主细胞集合中的克隆 cDNA（互补 DNA）片段的组合，构成生物体转录组的一部分，并作为文库存储。 cDNA 是由细胞核中发现的完全转录的 mRNA 产生的，因此仅包含生物体的表达基因。 同样，可以生成组织特异性 cDNA 文库。 在真核细胞中，成熟的 mRNA 已经被剪接，因此产生的 cDNA 没有内含子，可以很容易地在细菌细胞中表达。 虽然 cDNA 文库中的信息是一种强大而有用的工具，因为基因产物很容易识别，但文库缺乏有关增强子、内含子和基因组 DNA 文库中发现的其他调控元件的信息。

cDNA 是使用逆转录酶从真核细胞的成熟 mRNA 创建的。 在真核生物中，poly-(A) 尾巴（由长序列的腺嘌呤核苷酸组成）将 mRNA 与 tRNA 和 rRNA 区分开来，因此可用作逆转录的引物位点。 这有一个问题，即并非所有的转录本，例如组蛋白的转录本，都编码 poly-A 尾巴。

在复制真核基因组时通常使用 cDNA 文库，因为信息量会减少以从文库中移除大量非编码区域。 cDNA 文库用于在原核生物中表达真核基因。 原核生物的 DNA 中没有内含子，因此不具备任何可以在转录过程中将其切除的酶。 cDNA没有内含子，因此可以在原核细胞中表达。 cDNA 文库在反向遗传学中最有用，在这种情况下，额外的基因组信息用处不大。 此外，cDNA 文库经常用于功能性克隆，以根据编码蛋白质的功能识别基因。 在研究真核 DNA 时，表达文库是使用互补 DNA (cDNA) 构建的，以帮助确保插入片段是真正的基因。

可以使用限制性位点接头克隆 cDNA 分子。 接头是短的双链 DNA（寡脱氧核糖核苷酸）片段，长约 8 至 12 个核苷酸对，包括限制性核酸内切酶切割位点。 cDNA 和接头都有平端，可以使用高浓度的 T4 DNA 连接酶将其连接在一起。 然后通过用适当的核酸内切酶切割 cDNA 末端（现在具有带有掺入位点的接头），在 cDNA 分子中产生粘性末端。 然后克隆载体（质粒）也被适当的核酸内切酶切割。 在将插入物的粘性末端连接到载体中之后，将所得的重组 DNA 分子转移到大肠杆菌宿主细胞中进行克隆。