表达载体
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表达载体
表达载体,也称为表达构建体,通常是为在细胞中表达基因而设计的质粒或病毒。 该载体用于将特定基因导入靶细胞,并能支配细胞的蛋白质合成机制,产生该基因编码的蛋白质。 表达载体是生物技术中生产蛋白质的基本工具。
该载体被设计为包含充当增强子和启动子区域的调节序列,并导致表达载体上携带的基因的有效转录。 精心设计的表达载体的目标是高效生产蛋白质,这可以通过生产大量稳定的信使 RNA 来实现,然后将其翻译成蛋白质。 可以严格控制蛋白质的表达,并且仅在必要时通过使用诱导剂才大量产生蛋白质,然而在一些系统中蛋白质可以组成型表达。 大肠杆菌通常用作蛋白质生产的宿主,但也可以使用其他细胞类型。 使用表达载体的一个例子是胰岛素的生产,胰岛素用于糖尿病的医学治疗。
元素
表达载体具有任何载体可能具有的特征,例如复制起点、选择标记和用于插入基因的合适位点,如多克隆位点。 克隆的基因可以从专门的克隆载体转移到表达载体,尽管可以直接克隆到表达载体中。 克隆过程通常在大肠杆菌中进行。 用于在大肠杆菌以外的生物体中生产蛋白质的载体,除了适合其在大肠杆菌中繁殖的复制起点外,还可能具有允许它们在另一生物体中维持的元件,这些载体称为穿梭载体。
表达/生产系统
不同的生物体可用于表达基因的靶蛋白,因此所用的表达载体将具有用于特定生物体的特异性元件。 最常用于蛋白质生产的生物体是大肠杆菌。 然而,并非所有蛋白质都能在大肠杆菌中成功表达,或以正确形式的翻译后修饰(如糖基化)表达,因此可以使用其他系统。
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