高分辨率熔解

高分率熔解 (HRM) 分析是分子生物学中一项强大的技术，用于检测双链 DNA 样本中的突变、多态性和表观遗传差异。 它是由爱达荷科技公司和犹他大学发现和开发的。 与其他基因分型技术相比，它具有优势，即：

• 与测序和 TaqMan SNP 分型等其他基因分型技术相比，它具有成本效益。 这使其成为大规模基因分型项目的理想选择。
• 它快速而强大，因此能够快速准确地对许多样本进行基因分型。
• 很简单。 借助高质量的 HRM 检测，非遗传学家可以在任何实验室使用具有 HRM 功能的实时 PCR 机器进行强大的基因分型。

HRM 分析是在双链 DNA 样本上进行的。 通常，用户会在 HRM 分析之前使用聚合酶链式反应 (PCR) 来扩增他们感兴趣的突变所在的 DNA 区域。 在样本管中，现在有许多感兴趣的 DNA 区域的拷贝。 这个被放大的区域被称为扩增子。在 PCR 过程之后，HRM 分析开始。 该过程只是将扩增子 DNA 从大约 50 ˚C 精确加热到大约 95 ˚C。 在此过程中的某个时刻，达到扩增子的解链温度，两条 DNA 链分离或解链。

HRM 的关键是实时监控这种链分离。 这是通过使用荧光染料实现的。 用于 HRM 的染料被称为嵌入染料，具有独特的特性。 它们与双链 DNA 特异性结合，当它们结合时会发出明亮的荧光。 在没有双链 DNA 的情况下，它们无法结合，只能发出低水平的荧光。 在 HRM 分析开始时，由于扩增子有数十亿个拷贝，样品中会发出高水平的荧光。 但随着样品被加热，两条 DNA 链解开，双链 DNA 的存在减少，因此荧光减弱。 HRM 机器有一个摄像头，通过测量荧光来观察这个过程。 然后机器简单地将这些数据绘制成称为熔解曲线的图表，显示荧光水平与温度的关系：

传统的 SNP 分型方法通常既费时又昂贵，需要将多个基于探针的检测方法多重在一起或使用 DNA 微阵列。 HRM 更具成本效益，减少了设计多对引物和购买昂贵探针的需要。 HRM 方法已成功用于检测基因 Vssc（电压敏感钠通道）中单个 G 到 A 的取代，该取代赋予对 ac 的抗性。