蛋白质折叠

蛋白质折叠是物理过程，通过该蛋白链获得其天然 的三维结构中，构象即通常生物功能，以迅速和可再现的方式。这是一个物理过程，多肽从一个随机的线圈中折叠成其特征和功能性三维结构。当从mRNA序列翻译成氨基酸的线性链时，每种蛋白质都以未折叠的多肽或无规卷曲的形式存在。该多肽缺乏任何稳定的（持久的）三维结构。当多肽链由核糖体合成时，线性链开始折叠成其三维结构。即使在多肽链的翻译过程中，折叠也开始发生。氨基酸彼此相互作用，产生清晰的三维结构，即折叠的蛋白质，称为天然状态。最终的三维结构由氨基酸序列或一级结构（Anfinsen信条）确定。

正确的三维结构是功能是必需的，尽管功能蛋白质的某些部分可以保持展开，使得蛋白质动力学是重要的。无法折叠成天然结构通常会产生失活的蛋白质，但在某些情况下，错误折叠的蛋白质会具有修饰或毒性功能。据信几种神经退行性疾病和其他疾病是由错误折叠的蛋白质形成的淀粉样 蛋白原纤维的积累导致的。许多过敏是由于某些蛋白质折叠不正确引起的，因为免疫系统不会产生抗体对于某些蛋白质结构。

蛋白质的变性是从折叠到未折叠状态的转变过程。它发生在烹饪、烧伤、蛋白病和其他情况下。

折叠过程的持续时间视目标蛋白质而异。在细胞外进行研究时，最慢的折叠蛋白主要由于脯氨酸异构化而需要花费数分钟或数小时才能折叠，并且在过程完成之前必须经过许多中间状态，如检查点。另一方面，长度不超过一百个氨基酸的非常小的单结构域蛋白通常会在一个步骤中折叠。毫秒级的时间尺度是常态，最快的已知蛋白质折叠反应在几微秒内即可完成。

尽管可以通过突变研究得出有关蛋白质折叠的推论，但通常，用于研究蛋白质折叠的实验技术依赖于蛋白质的逐渐展开或折叠以及使用标准的非晶体学技术观察构象变化。

X射线晶体学是试图破译折叠蛋白质的三维构型的更有效和重要的方法之一。为了能够进行X射线晶体学分析，所研究的蛋白质必须位于晶格内。为了将蛋白质放入晶格中，必须有一种合适的结晶溶剂，在溶液中获得过饱和水平的纯蛋白质，并在溶液中沉淀出晶体。一旦蛋白质结晶，X射线束就可以通过晶格集中，这将使束衍射或向各个方向向外发射。这些射出的光束与封闭在其中的蛋白质的特定三维构型相关。X射线与周围蛋白质晶体晶格中各个原子周围的电子云相互作用，并产生可辨别的衍射图。只有通过将电子密度云与X射线的幅度相关联，才能读取此模式，并得出有关使该方法复杂化的相位或相角的假设。没有通过称为傅立叶变换的数学基础建立的关系因此，“相位问题”将使预测衍射图非常困难。诸如多重同构置换之类的新兴方法利用重金属离子的存在将X射线衍射成更可预测的方式，从而减少了涉及的变量数量并解决了相位问题。

荧光光谱法是研究蛋白质折叠状态的高度灵敏的方法。苯丙氨酸（Phe）、酪氨酸（Tyr）和色氨酸（Trp）这三种氨基酸具有固有的荧光特性，但由于它们的量子产率，实验上仅使用Tyr和Trp足够高以提供良好的荧光信号。Trp和Tyr都被280 nm波长激发，而只有Trp被295 nm波长激发。由于它们的芳香特性，经常发现Trp和Tyr残基完全或部分掩埋在蛋白质的疏水核中，两个蛋白质结构域之间的界面或寡聚蛋白质的亚基之间的界面。在这种非极性环境中，它们具有很高的量子产率，因此具有很高的荧光强度。一旦破坏蛋白质的三级或四级结构，这些侧链就会更暴露于溶剂的亲水环境中，并且其量子产率降低，从而导致荧光强度降低。对于Trp残基，其xxx荧光发射波长也取决于其环境。

通过测量荧光发射强度或xxx发射波长随变性值的变化，荧光光谱法可用于表征蛋白质的平衡展开。变性剂可以是化学分子（尿素、盐酸胍）、温度、pH、压力等。不同但不连续的蛋白质状态（即天然状态、中间状态、未折叠状态）之间的平衡取决于变性剂值。因此，它们的平衡混合物的整体荧光信号也取决于该值。这样就获得了一种将总蛋白信号与变性值相关的曲线。平衡展开的概况可以使人们能够检测和识别展开的中间体。Hugues Bedouelle已开发出通用方程式，以从这些轮廓中获得表征同聚或异聚蛋白，直至三聚体和可能的四聚体的展开平衡的热力学参数。荧光光谱可以与快速混合设备组合使用，以测量蛋白质折叠动力学， 生成人字形图并进行Phi值分析。