基因捕获
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基础捕获
基础捕获是一种高通量方法,用于在生物体的基因组中引入插入突变。
方法
捕获是用基因捕获载体进行的,其主要元素是一个基因捕获盒,由无启动子报告基因和/或可选择的遗传标记组成,两侧是上游 3′ 剪接位点(剪接受体;SA)和下游转录终止序列( 聚腺苷酸化序列;polyA)。
当插入表达基因的内含子时,基因陷阱盒以融合转录本的形式从该基因的内源启动子转录,其中插入位点上游的外显子按框剪接至报告基因/ 选择标记基因。 由于转录在插入的聚腺苷酸化位点过早终止,因此处理后的融合转录物编码细胞蛋白和报告基因/选择标记的截短和无功能版本。
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因此,基因陷阱同时失活并报告被捕获基因在插入位点的表达,并提供一个DNA标签(gene trap sequence tag,GTST)用于快速识别被破坏的基因。
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International Gene Trap Consortium 正在集中处理数据并提供经过修饰的细胞系。
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