膜片钳
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膜片钳是一种电生理学实验室技术,用于研究单个分离的活细胞、组织切片或细胞膜贴片中的离子电流。该技术特别适用于神经元、心肌细胞、肌纤维和胰腺β细胞等可兴奋细胞的研究,也可应用于专门制备的巨型原生质球中细菌离子通道的研究。
可以使用电压钳位技术执行贴片钳位。在这种情况下,细胞膜上的电压由实验者控制,并记录产生的电流。或者,可以使用电流钳技术。在这种情况下,通过膜的电流由实验者控制,并记录由此产生的电压变化,通常以动作电位的形式。
ErwinNeher和BertSakmann在1970年代末和1980年代初开发了膜片钳。这一发现首次使记录单个离子通道分子的电流成为可能,从而提高了对通道参与基本细胞过程(如动作电位和神经活动)的理解。Neher和Sakmann因这项工作获得了1991年的诺贝尔生理学或医学奖。
膜片钳基本技术
为了在更短的时间内廉价地收集大量数据,已经开发了自动膜片钳系统。此类系统通常包括一次性使用的微流体装置,注射成型或聚二甲基硅氧烷(PDMS)铸造芯片,以捕获一个或多个细胞,以及一个集成电极。
在这种自动化系统的一种形式中,使用压力差来迫使正在研究的细胞被拉向移液管开口,直到它们形成千兆密封。然后,通过将移液管尖端短暂暴露在大气中,从移液管突出的膜部分爆裂,膜现在处于由内向外的构象,位于移液管尖端。在一个完全自动化的系统中,移液器和膜贴片可以通过一系列不同的测试溶液快速移动,从而在记录过程中将不同的测试化合物应用于膜的细胞内侧。
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