基因文库
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简介
在分子生物学中,库是一个DNA片段的集合,通过分子克隆的过程在微生物群体中储存和繁殖。有不同类型的DNA文库,包括cDNA文库(由反转录的RNA形成)、基因组文库(由基因组DNA形成)和随机突变体文库(由加入替代核苷酸或密码子的新基因合成形成)。
DNA文库技术是目前分子生物学、基因工程和蛋白质工程的主流,这些文库的应用取决于原始DNA片段来源。克隆载体和文库制备技术存在差异,但一般来说,每个DNA片段都被xxx地插入到克隆载体中,然后将重组DNA分子库转移到细菌(细菌人工染色体或BAC库)或酵母的群体中,这样每个生物体平均包含一个构建体(载体+插入物)。随着生物群的培养,其中包含的DNA分子被复制和繁殖(因此被克隆)。
术语
cDNA文库制备技术概述
DNA提取
如果创建一个mRNA文库(即用cDNA克隆),有几种可能的方案来分离全长mRNA。要从基因组DNA(也称为gDNA)文库中提取DNA,DNA的miniprep可能是有用的。
插入前的准备工作
cDNA文库需要注意确保mRNA的全长克隆被捕获为cDNA(以后将被插入载体)。为此,已经设计了一些协议来优化第1条cDNA链和第2条cDNA链的合成,同时也能有针对性地克隆到载体中。
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